整个梯度离心要求慢升慢降，需要在离心机里设置加速度，一般有 1 到 9 级可选。 Percoll 升降都要 3 的加速度; Ficoll 升速时没有要求，降速时要慢，建议关闭刹车，设置加速度为 3。 Ficoll是用来分离特定密度细胞的分离液（1.077, 1.084 和 1.073 g/mL三款），适于已知密度细胞的分离。 对面的师弟师妹看过来，这里的知识很精彩！ 俗话说工欲善其事，必先利其器，今天就让小优带你深度了解Percoll 、Ficoll前世今生，让你的细胞分离不再难。
Ficoll应避光储存于4-30℃之间，在该条件下可以保存3年。 打开后建议避光存储于 4-8℃，使用前先放置在常温一段时间。 Percoll 的pH 大约为9.0，在不改变任何性质下可调节为5.5 到10.0。 如果pH 降低到5.5 以下，可能发生胶凝作用。 在存在二价阳离子时也会导致凝胶作用，升高温度会加剧这种作用。
淋巴细胞分离液: 单个核细胞的分离纯化
吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。 离心完成后，从管底往上依次为红细胞-粒细胞-Ficoll 淋巴细胞分离液 细胞分离液-淋巴细胞-血小板-血浆。 在取淋巴细胞时要小心将上层的血浆和血小板移除后再吸取淋巴细胞。 、本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。 2、为保持淋巴细胞的活性，血液最好选取采血2 h以内的新鲜抗凝血液；如需对分离的淋巴细胞进行进一步的培养和检测，请在采血和分离过程中注意无菌操作。 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！
可能是由于样品含有非正常密度的细胞；这些细胞的密度不同于那些来自正常人血液中细胞的密度。 可能遇到病态血液样品、非人血液样品，或来自外周血之外的来源的样品。 Percoll 淋巴细胞分离液 可能比 Ficoll-Paque PLUS 更加适合此类分离。 并且与外周全血等渗的溶液（分离液）,经过密度梯度离心,使一定密度的细胞按照相应密度梯度分布,从各种血细胞中分离出淋巴细胞。
淋巴细胞分离液: 使用FicollPaque分离人PBMC
在此基础上，再按照百分比使用0.15M的NaCl或者0.25M的蔗糖进行配置。 Percoll/Percoll 淋巴细胞分离液 PLUS在生产过程中是经过高温灭菌处理的，打开后可以直接使用。 如果需要灭菌，可以使用条件为 120℃，30 min，但是注意只有原液可以灭菌，配置后的溶液或者SIP不建议灭菌。 Percoll 在没有被打开时，在室温下可以保存5年，打开后短期内可以保存在4-8℃，使用时拿到常温先放置一段时间。 如若长时间不使用，Percoll可以冷冻保存在-18℃，拿出融化时会形成梯度，在使用前必须先颠倒混匀后使用。 Biosharp将依靠自主研究开发的高技术高质量和有绝对的价格竞争力的产品，力争打破国外大公司在生命科学领域垄断地位，为国内生命科学研究人员提供高品质产品及专业的技术服务，并立志成为中国乃至世界一流的生命科学产品供应商。
- 可能遇到病态血液样品、非人血液样品，或来自外周血之外的来源的样品。
- 吸取分离液液面上的细胞，就可从外周血中分离到单核细胞，并进行之后的培养与检测。
- 与其他血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，并且具有更强的吞噬作用。
- Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400,000，当密度为1.2g／ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。
- 通过这一操作可以除掉一部分血小板。
激活了的单核细胞和组织巨噬细胞能生成并释放多种细胞毒、干扰素和白细胞介素，参与机体防卫机制。 在炎症周围单核细胞能进行细胞分裂，并包围异物。 、离心结束后,此时离心管中由上至下细胞分四层：第一层为血浆层,第二层为环状乳白色淋巴细胞,第三层为透明分离液层,第四层为红细胞层。 如果想简单、快速地分离细胞，大家第一反应肯定是密度梯度离心介质；如果您想分离人淋巴细胞，那当然少不了Ficoll啦。 ② 大体积样品可以通过增加离心管的直径来进行分离，保持同样的高度比例。 增加离心管直径并不影响所需的分离时间。
淋巴细胞分离液: 版权声明
2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。 注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。 如血液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。 产品描述 描述 淋巴细胞分离液是一种旨在通过葡聚糖和液影酸钠混合液达到特定的比重，然后通过离心分层获得纯化的单核细胞淋巴细胞。
- 打开后建议避光存储于 4-8℃，使用前先放置在常温一段时间。
- 整个梯度离心要求慢升慢降，需要在离心机里设置加速度，一般有 1 到 9 级可选。
- 可能是由于样品含有非正常密度的细胞；这些细胞的密度不同于那些来自正常人血液中细胞的密度。
本品内毒素水平非常低，小于0.12EU/mL，分离所得的细胞中95%左右为单个核细胞，细胞存活率大于90%，回收率为60%左右。 淋巴细胞分离液 可能是由于离心机转子振动，导致梯度混合。 离心机转子振动可能导致淋巴细胞带的增宽，与下层细胞混合。
淋巴细胞分离液: 单个核细胞的分离
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单个核细胞的体积、形状和比重与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞比重较大，为 1.092 左右，淋巴细胞和单个核细胞比重为 1.075 左右。 分离单核细胞常使用Ficoll作为分离液的主要成分，它是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400000，当密度为1.2g/ml时也未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。 红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分离液比重，离心后漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。 吸取分离液液面上的细胞，就可从外周血中分离到单核细胞，并进行之后的培养与检测。 Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400,000，当密度为1.2g／ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。 红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。
淋巴细胞分离液: 免疫磁珠法分离 B 淋巴细胞
选择合适的转速，以避免自发共振频率。 在高温下，Ficoll-Paque PLUS 的密度较小，一些淋巴细胞可能穿透 Ficoll-Paque PLUS层。 ① 在较低的离心力情况下（比如 200 g）进行离心处理，血小板密度比较低，会留在血浆中，PBMC 在沉淀里。 通过这一操作可以除掉一部分血小板。
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在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念，单核细胞起源于骨髓中的造血干细胞，并在骨髓中发育。 与其他血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，并且具有更强的吞噬作用。 固定在组织中的单核细胞称为组织巨噬细胞，它们经常大量存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。
