根据阿仑尼乌斯（Arrhenius）方程，温度越低，化学反应速度越慢，样品的保存时间越长。 因此，为了使生物样品在一定的时间内保持稳定，人们按不同需求将样品保存在4℃，-20℃，-80℃ 或温度更低的冰箱中，或者保存在液氮中。 本文谈谈生物样品低温保存尤其是冻存时需要注意的一些问题。 抗体由于性质和所使用的储存条件等各有不同，其保质期可能从几周到几年。
具备年产制冷产品600万台、商超设备30万台、超低温及生物医疗产品10万台的生产能力。 此外还有多款疫苗保存箱产品，涵盖不同的温度范围。 要检测多种项目时，最好一种项目一管血液，防止标本污染。 在不能分开时，要注意检验的顺序，如一管血液要检测生化和 PCR ，那必须先检测 PCR 后再检测生化，防止检测生化后的标本污染对 PCR 检测结果的影响。
低温冷冻血清: 血清主要成分
血标本如不能及时测定，有必要将血清分离出来保存。 （1）需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。 4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月，由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。 虽然液相液氮的温度更低一些（-196℃），但气相液氮的温度（-150℃）仍在临界温度之下。
当从冷冻状态中解冻时，最hao的方式是 37℃ 水浴，过程不宜太长，避免损害样本的生物活性。 1995 年，英国血库曾发生过轰动一时的液氮冻存中破裂的血袋之间乙型肝炎病毒交叉污染事件，这是样本库污染的典型案例。 液氮并不能做到真正无菌，它不能消毒，只能降低细菌、病毒的活性，这种潜在的生物危害会使浸泡在液氮中的样本被污染。 因此研究者又发明了一种新的液氮方法——气相液氮罐，将样本置于液氮蒸气中。
低温冷冻血清: 相关产品
生物体虽然能在低温下长期保存，但是在冷冻和复温过程中非常容易受到损伤，而这个损伤基本上发生在－60℃~0℃这段温度范围内。 冰晶会刺穿、挤压细胞膜、细胞器等，并且胞内冰的形成使细胞内电解质浓度升高，pH变化，进而引起部分蛋白质的变性以及溶酶体的损伤，最终导致细胞死亡。 所以，在不同的生物体低温保存过程中，需要获得其“最佳冷冻速率”。 该速率既可以防止胞内冰形成，又能将“溶质损伤”降到最小，以提高细胞低温保存后的恢复率。 根据美国Alcor生命延续基金会的人体低温保存方案 ，理想情况下，在人体心脏停止跳动后，等候的工作人员迅速利用生命支持技术来维持其脑活力。 当体温降低到接近水的冰点时，进行冷冻保护剂灌注。
首先，刚到货的血清，趁着它还冻手，赶紧放进-20℃冰箱中，避免反复冻融。 当然，如果你的课题组不差钱，-80℃冰箱空间充足，把血清储存进去也是没有问题的。 由于多数机构手术取材地点与组织标本库并不在同一楼内，组织标本的转移、运输也需要一定时间，故各单位可酌情配备一些不太昂贵的组织储存和周转设备。 DMSO容易过冷并且室温下缓慢融化，收到的产品应为固体并非液体状态。
低温冷冻血清: 为什么选择 Recovery 细胞培养冻存培养基？
通常建议在 -20°C 下保存抗体，因为在 -80°C 下保存抗体的优势并不明显。 但是，由于抗体存在形式差异，保存温度可能有所不同，因此请务必查看官网说明书，获取具体的温度建议。 例如，我们的 不含 BSA 和叠氮化物的抗体 应在 4°C 下保存，不应冷冻。 国外有人对大鼠血清中的18种化学成分进行了检测，发现反复冻融3次对其中的14种成分没有显著影响，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，胆红素，甚至包括氯离子有一些明显变化，但其浓度变化控制在10%以内。 Y/X计算细胞倍增时间（t 为细胞倍增时间， Y 为细胞峰值前1 d 的细胞数， X 为接种细胞数， T 为细胞生长时间）。 笔者观察了一下该文章的结果列表，发现在冻融20次之前，细胞倍增时间延长2-3小时不等，20次时，则延长3-4小时。
例如，人类卵母细胞冷冻作为生育力保存的途径之一，已经在辅助生殖技术中扮演着不可或缺的角色。 而卵母细胞的冷冻技术，特别是冷冻方式和冷冻保护剂，经过多年的发展取得了较大的进步。 人体结构由微观到宏观可以分为细胞、组织、器官、系统与人体五个层次，低温保存的终极目标是实现人体长期的低温保存并复苏。 就目前的科技水平而言，实现这一目标任重而道远，但低温保存领域仍有着广泛的应用。 （2）热灭活是指56℃，30分钟加热已完全解冻的血清。
低温冷冻血清: 生物样品分析方法的建立
其转头为高强度钛合金制成，可依据需求改换不同容量和不同型号的转速转头。 超速离心机驱动电机有两种，一种为调频电机直接升速，另一种为经过变速齿轮箱升速。 为了避免驱动电机在高速运转中产热，装有冷却驱动电机系统（风冷、水冷），限速器、记时器、转速记载器等。 低速低温离心机转速普通不超越10000rpm，在实验室中最常用于大量初级分离你，可分别提取生物大分子、沉淀物等。 其转头多用铝合金制的甩平式和角式两种，离心管有硬质玻璃、聚乙烯硬塑料和不锈钢管多种型号。
- 如果抗体浓度很低，可以在抗体溶液中添加蛋白稳定剂，如 BSA。
- 通常建议在 -20°C 下保存抗体，因为在 -80°C 下保存抗体的优势并不明显。
- 下图（图1）显示了上海伯豪生物技术有限公司生产的RNAsafety组织保存液对组织内RNA的低温保存效果。
- 样品从开始收获到固定或低温保存前这段时间，仍有一些生化过程在较快地进行。
- 抗原诊断原料可以用于制备校准品、质控品、标准品，还可以作为免疫原制备抗体。
- 生物样品的低温保存，是目前生物样品的主要保存方式。
- 5、犬抗毒血清：犬狂犬病抗毒血清、犬瘟热抗毒血清、犬副流感抗毒血清、犬腺病毒抗毒血清与犬细小病毒病抗毒高免血清，狐貉水貂的伪狂犬抗毒血清、细小病毒抗毒血清、乙脑抗毒血清等。
- 虽然液相液氮的温度更低一些（-196℃），但气相液氮的温度（-150℃）仍在临界温度之下。
DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。 复苏时动作要快，尽快洗掉二甲基亚砜，否则会造成对细胞严重的毒性。 二甲基亚砜（DMSO）是目前最好的细胞冻存保护剂，但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂。 研究结果表明，培养液中DMSO浓度为10%时，细胞生长抑制率近100%；1‰浓度时抑制率为35%，即使是0.04‰的浓度，DMSO对细胞的生长也有不利的影响。 低温生物学是一门研究低温条件下（0℃以下或者接近0℃）生命现象以及生物体保存的科学。
低温冷冻血清: 细胞冻存培养基
用上海伯豪的RNAsafetyTM组织保存液低温保存大鼠肝脏组织。 在4℃和-70℃放置三个月后，指示RNA完整性的RIN值（纵坐标显示的数值）在7.0（红线所示）以上。 低温冷冻血清 微量样本中，如果出现微量的外源性序列干扰，则测序文库扩增时会将其显著放大，干扰后期的数据分析；而芯片采用特异性探针检测，则不会受到此种干扰。 上周为大家介绍了专门为临床微量循环样本而优化的lncRNA芯片和ceRNA芯片（用“芯”让微量循环样本不再难做），今天小编就来给大家科普最常见的两类微量样本——血清和血浆。 国外业务营收在公司总营收中的占比低于10%，上半年国外业务营收同比（较上年同期）降幅约两成，近期有向好迹象，但其根本上受制于国外疫情发展，远期无法预计。
根据普诺赛实验室细胞培养经验，推荐冻存液配比：55%基础培养基＋40%胎牛血清＋5%DMSO，难养细胞可用90%胎牛血清＋10%DMSO冻存。 所有试剂、样品等需要严格按温度说明存放在指定的存储温度区域，切不可混放、乱放，易造成样本溶解、试剂失效。 ②要偶联带有氨基基团的抗体：叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。 偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01％。 对于需要偶联的抗体，thimerosal 可以替代叠氮化钠作为保护剂。 有些科研工作者会向抗体中加入50%的甘油来避免反复冻融，甘油在-20℃会降低冰点。
低温冷冻血清: 低温离心机的工作原理及应用
主要是低温保存引起的结构及功能上的损伤和改变，还有其蕴含的生物分子信息也有可能发生改变。 其次还有低温保存对场地、设备、资金和管理方面的要求比较高等问题。 通常所讲的生物样本库主要保存的都是生物分子信息，并不要求样本保持活性。 广义来讲永生细胞库、脐血库、精子库等也可列入生物样本库的范畴，但是它们要求保存的样本能够用于再生或疾病治疗等目的，因此保存的样本要求具有活性，其所采用的技术叫做低温保存技术。
用于一般血液学检查，不能用于血凝、微量元素及PCR检查。 由于EDTA会螯合重金属离子，用该抗凝剂的话，部分带有金属离子的大分子酶都会有大量损失，具体看客户测定的指标来选择，做血常规的话必须用EDTA抗凝。 采血管内壁均匀涂有防止挂壁的硅油，同时添加了促凝剂。
低温冷冻血清: 血清保存注意事项
但是，由于蛋白稳定剂会与抗体竞争，降低结合效率，所以请勿在您打算偶联的抗体中添加蛋白稳定剂。 低温冷冻血清 由于 -80°C 低于甘油的冰点，所以不建议在 -80°C 下保存添加甘油的溶液。 此外，甘油或其他冷冻保护剂可能会被细菌污染，因此，您必须获得无菌溶液。 分装量越少，储备液浓度就越容易受到蒸发以及抗体吸附在存放瓶表面的影响。 如果保存得当，大多数抗体的活性均可保持数月甚至数年。
随着制冷技术的进步，深低温冰箱已经出现在某些实验室。 箱内温度也比较均匀恒定，但深低温冰箱降温速度低于液氮，一旦开启取放样品时容易造成较大范围的温度波动，温度恢复时间也相对较长。 生命科学研究中组学技术的发展以及临床医疗领域新一代检测技术的进步，促进了对生物样品的需求，也促进了生物样品的采集、保存等环节的正规化、规模化。 常温保存能耗少、环保，有时也非常方便，是一种有潜力的保存方式。
低温冷冻血清: 生物样品的低温保存
将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。 ●提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。 低温冷冻血清 当需要冻融样本时，应按照标准流程确保样本的稳定性和质量。 样本在冻存过程中应采用合适的冷却速度，控制冰晶大小，以及冰晶形成速度，这些将影响到样本的质量。
低温冷冻血清: 试剂总结：试剂的定义、分类、存放
众多研究显示，长期冻存对DNA大分子的稳定性影响不大，甚至石蜡包埋组织块中的DNA也可以进行分子生物学分析。 近些年，玻璃化冷冻由于在保存过程中不产生冰晶，受到了越来越多的关注。 它是一种利用高浓度冷冻保护剂溶液的超速冻存生物体的方法，实施冷冻保存过程中快速降温及升温，才有可能实现成功的玻璃化冷冻。 但是当生物体体积增大时，实施起来就会有较大困难。 由佩内斯生物传热方程（Pennes bio-hent equation）可知，当血液灌注率及人体代谢产热停滞时，热流密度正比于热导率和温度差。
低温冷冻血清: Recovery 细胞培养冻存培养基
但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。 （1）收到抗体后需先在 rpm 离心 1-5 分钟，再打开管盖进行分装和保存，如果抗体体积不足50 ul，可延长离心时间至 5 分钟，从而确保抗体全部离心下来。 显微镜下“小黑点”：经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”，常误认为血清受污染。 一般情况下，此小黑点不会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的血清。 3、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。 报道了一种静电纺丝低温保护剂基质，可用于液体样本的等温玻璃化储藏，5种肿瘤标记物的保存效果表明LDH、CRP和PSA的表达水平在复水后完全恢复，而MMP-7和C3a能够恢复90%。
低温冷冻血清: 抗原活性
可用离心3000rpm，5分钟去除，也可不用处理。 避免使用无霜冰箱：虽然您的实验室不太可能会反复冻融，但还是提醒您避免反复冻融。 因此，抗体瓶应放置于冰箱中温度变化最小的区域，例如冰箱后壁处，而非冰箱门处。 一般情况下，已经解冻的血清，无论是配成完全培养基还是在冰箱里备用，都不要超过一周（7天），原因也很简单，存放太久，生长因子等物质容易失活，而且比较容易受到污染，影响实验结果。 溶血液的制备：定量吸取红细胞或者全血，按比例加入冷蒸馏水，充分漩涡混匀制备溶血液(对光观察，溶液澄清透亮,可显微镜观察红细胞是否破裂,如未破可延长混匀时间)，稀释成不同浓度用于不同指标的检测。 二是：根据用户实验要求，必须配有低温控制系统，比如分离一些有机活性物质：酶，有机易挥发的物质等需要恒温或是温差不超过正负10℃。
组织中 DNA 的稳定性较好，可以在 -80℃ 下保持数年或更长时间。 但 低温冷冻血清 RNA 则容易被广泛分布于细胞和各种组织里的 RNA 酶降解。 RNA 在稳定剂中的储存时间一般不超过 5 年。
低温冷冻血清: 生物样品分析方法确证（二）
组织中的DNA可以在-80℃下可以保持数年或更长时间。 组织中的RNA在-80℃下的稳定性随不同组织或细胞而异，但一般不超过5年。 一些组织内的RNA在-80℃下不到一年就发生了降解。
抗体能否正确保存，直接决定了抗体的活性和使用效果。 每个抗体有其独特的保存较好条件，但我们依然可以总结抗体保存的一般准则以及一些注意事项。 为了维持蛋白质的活性，以及防止其聚集，经常保存在一定浓度的甘油，蔗糖，或类似的物质里面。 如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。 低温保存技术虽然可以使细胞、某些组织和器官等保存成活，但是仍然存在一些亟待解决的问题。
低温冷冻血清: 储存于-20℃ – 70℃ 低温冰箱的血清可以保存多久
此温度是水的结晶温度，容易对细胞和组织的微观结构造成损害，一般不使用这一温度来保存组织和细胞。 且在组织样本内生物大分子受到细胞组织内多种因素的影响，稳定性有可能明显降低，所以通常样本库不使用 -60~0℃ 作为储存温度。 另外一些检测项目都有时间要求，不适宜保存过久，另外有些检测项目不适宜冻融。 普通血液标本采集1h后应离心分离血清，然后加盖2℃～8℃冷藏保存即可存放48h。 若48 h内不能完成的检测项目，应于-20 ℃保存，长期保存血清可以在-40℃。 不过根据现有数据和检验科实际经验，冷冻固定含水量较大的血液标本时难以避免冰晶对结构的破坏，故超低温快速冷冻固定多适用于组织而非血液标本。
